一、RNA HS Assay Kit存放條件與注意事項：
1.溫度要求
未開封試劑盒：存放在-20℃，避免反復凍融。
已開封試劑盒：密封后可短期存放于4℃，建議1個月內(nèi)用完，避免活性成分降解。
關鍵組分：若頻繁使用，可分裝后存于-20℃，減少凍融次數(shù)。
2.防潮與避光
試劑盒應遠離潮濕環(huán)境，避免吸濕導致粉末結塊或酶失活。
避光保存熒光染料、底物等光敏成分，可用鋁箔紙包裹試劑盒或存放于暗盒中。
3.防止污染
開封后立即蓋緊管蓋，操作時避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠污染。
使用前后擦拭操作臺和移液器，建議在超凈工作臺內(nèi)操作。
二、RNA HS Assay Kit使用前準備：
1.試劑檢查
離心確認：開蓋前輕柔離心，確保管壁殘留液體沉底。
溶解沉淀：若試劑因運輸出現(xiàn)結晶，需室溫緩慢溶解并混勻，避免高溫或超聲波破碎。
有效期驗證：檢查試劑瓶標簽上的有效期和批次號，過期或性狀異常的試劑勿用。
2.實驗設計優(yōu)化
設置對照組：每次實驗需包含無模板對照（NTC）、陽性對照（如標準品）和陰性對照（如水替代模板）。
預混Master Mix：提前配制含熒光染料、酶、dNTP等的主混合液，漩渦振蕩混勻后短暫離心，減少分裝誤差。
引物驗證：新引物需通過梯度稀釋測試擴增效率，避免非特異性擴增或引物二聚體干擾。
三、RNA HS Assay Kit操作技巧：
1.加樣規(guī)范
精準移液：使用經(jīng)校準的移液器，加樣時垂直插入液面下，避免氣泡產(chǎn)生。
順序調整：最后加入模板RNA或反轉錄產(chǎn)物，減少交叉污染風險。
預混震蕩：加樣后輕輕拍打管壁混勻，或使用低速渦旋儀。
2.避免RNA降解
冰上操作：全程在冰盒或低溫金屬板上操作，尤其是RNA模板和逆轉錄步驟。
DNase處理：若RNA含痕量DNA，需用無核酸酶的DNase I處理，并徹*去除酶活性。
使用RNA酶抑制劑：在反應體系中添加RNase 抑制劑，尤其在樣本量低時。
3.儀器設置
熒光閾值調整：在指數(shù)擴增期設定閾值，避免過高或過低。
溫度校準：定期檢查PCR儀的溫控準確性。
多通道校正：若使用多通道熒光檢測，需對各通道進行交叉補償校準。
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